臨床輸血

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注意觀察比較不同濃度紅細胞懸液的顏色和密度！也可根據(jù)經(jīng)驗使用3%或者4%的商品化試劑紅細胞的顏色和細胞扣的大小來做標準對照。

問：為什么試管法血清學試驗需要洗滌患者紅細胞？

粘附在紅細胞表面的血清（漿）中的血型物質(zhì)（可溶性抗原）等會中和試劑抗體，造成凝集減弱或呈假陰性，影響紅細胞ABO血型抗原的檢測；粘附在紅細胞表面的冷自身抗體等可使血型檢測及直抗試驗出現(xiàn)假陽性；粘附在紅細胞上的抗體或其他球蛋白會中和抗球蛋白試劑，造成直抗試驗凝集減弱或呈假陰性。紅細胞洗滌過程可除去粘附在紅細胞上的抗體、蛋白成分以及可溶性抗原，故試管法血清學試驗需洗滌患者紅細胞。

問：為什么微柱凝膠法通常不需要洗細胞？

微柱凝膠免疫分析技術(shù)中微柱內(nèi)的介質(zhì)起到分子篩的作用，在一定離心力的作用下，分子篩的孔徑只允許游離紅細胞通過，聚集在微柱底部，即為陰性反應(yīng)；凝集的紅細胞因體積大于分子篩孔徑而被阻滯，不能通過微柱介質(zhì)層，滯留于微柱介質(zhì)的頂部或介質(zhì)的中間，即為陽性反應(yīng)。示意圖如下：

紅細胞沉降需要的離心力通常小于100 g，而抗體等蛋白質(zhì)復合物分子沉降分離需要的離心力至少是3000g。微柱凝膠卡離心機離心時，離心力通常小于300g，可使微柱凝膠孔反應(yīng)腔中的紅細胞下降分離到反應(yīng)柱中，而血清蛋白、球蛋白以及可溶性抗原抗體復合物等則不會跟隨紅細胞一起到達反應(yīng)柱中，由此就達到了分離紅細胞和血清中的抗體蛋白質(zhì)復合物的效果，所以通常就不需要洗滌紅細胞。

（伯樂離心力為85g；博迅為兩檔離心，離心力分別為66g和183g；奧森多為兩檔離心，離心力分別為55g和199g。）

微柱凝膠法相關(guān)知識背景

1984年，Jean Adam和Yves Lapierre首先發(fā)明了微柱凝膠檢測法，于1986年申請并獲得發(fā)明專利。

1988年，發(fā)明者瑞士達亞美（DiaMed）公司首先推廣微柱凝膠法（卡式），并在ISBT大會上展出，在此屆大會上引起轟動。自此，血型檢測領(lǐng)域?qū)儆谘湍z卡的時代到來了。

1996年 AABB 出版的《輸血科技術(shù) 手冊》（第 12 版）將微柱凝膠血型檢測列入紅細胞血型檢測常規(guī)技術(shù)之中。

附1：如何洗滌紅細胞 （參考AABB）

1、EDTA抗凝全血2ml，3000 rpm/min，離心5分鐘。

2、吸取上層血漿于干凈試管中，標記后待用。

3、下層血細胞層加入生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（PBS）5ml，混勻，洗滌（注意操作輕柔，防溶血?。?000rpm/min，離心5分鐘。

4、棄去上清液，重復步驟3，3-5次。

5、最后1次離心所得的上清液應(yīng)澄清，吸取并完全除去上清，即為洗滌后的壓積紅細胞，備用。

溫馨小提示：在日常工作中，我們可能沒有那么嚴格的按照AABB的要求離心5分鐘，久保田KA-2200離心機第3檔離心力為1000g，時間是1分鐘，可用于洗滌紅細胞。

附2：如何配制不同濃度的紅細胞懸液 

紅細胞抗原抗體特異性反應(yīng)時，產(chǎn)生的凝集與反應(yīng)物的濃度有關(guān)。一定數(shù)量的抗體中加入不同數(shù)量的紅細胞抗原，或者一定數(shù)量的紅細胞抗原加入不同數(shù)量的抗體都可能導致凝集強度的差異。抗原抗體數(shù)量只有在一個合適的比例才會發(fā)生最強反應(yīng)。因此，調(diào)整合適濃度的紅細胞懸液成為增強紅細胞抗原抗體反應(yīng)的關(guān)鍵因素。不同濃度紅細胞懸液與商品化抗-A和抗-B效價對比（見表2-1）。

洗滌后的紅細胞經(jīng)重離心后制備成壓積紅細胞，其紅細胞間隙內(nèi)仍存留少量血漿或生理鹽水，因此一般在制備紅細胞懸液時可默認壓積紅細胞間隙中存在10%的介質(zhì)溶液，計算后可根據(jù)表2-2的配制比例配制相應(yīng)濃度的紅細胞懸液。

操作上要求先加生理鹽水，后取紅細胞！注意觀察比較不同濃度紅細胞懸液的顏色和密度！也可根據(jù)經(jīng)驗使用3%或者4%的商品化試劑紅細胞的顏色和細胞扣的大小來做標準對照。

好啦，親愛的小伙伴們，今日分享就到這里啦。在日常工作中，您經(jīng)常遇到哪些比較疑惑的問題呢，歡迎在評論區(qū)留言告訴我們，我們將與您一起，共同探討學習。

附3：參考文獻 

1、《AABB技術(shù)手冊》（第20版），主譯：桂嶸、陳秉宇、黃遠帥、王勇軍 

2、《輸血人臨床輸血技術(shù)精進班（第一期）實驗手冊》 

3、《微柱凝膠免疫技術(shù)在疑難血型鑒定中的應(yīng)用》，主編：李凌波、陳維佳

4、《紅細胞血清學技術(shù)》，主編：沈偉、陳偉、劉鳳霞

本文作者：曾群娟，修改審核：高明、楊賀才。本文僅供學術(shù)交流，如對某一觀點有爭議，可評論區(qū)留言或后臺加小編微信討論。